细胞种属鉴定

一、细胞种属鉴定服务简介

      细胞系作为正常或肿瘤组织的模式细胞被广泛应用于科学研究和药物开发，然而很大一部分的细胞系被错误标记或被其它个体、组织、种系来源的细胞所替代，由于科学界无法解决此类问题以致大量因使用错误鉴定的细胞系而导致误导或存在潜在错误的学术论文发表。

      培养物的交叉污染以及随后污染细胞的过量生长是另一个引起细胞系错误鉴定的常见原因。这种情况发生的几率在以下条件会增加：试剂的共用、操作时反复使用相同的未经彻D消毒和清场的工具及设备、在没有充分分离每一细胞类型情况下同时对多个培养物进行操作。当交叉污染发生时，一种细胞类型迅速生长而超过另一种，在4-5次细胞传代后，一个纯的污染细胞培养物将会形成。

      在使用其它物种的滋养层（例如小鼠3T3细胞）来繁殖人类干细胞或原始细胞时有意地共培养会导致交叉污染或人类细胞系过生长。正常情况下，滋养层细胞处于无增殖状态，但只要生长抑制程序不w全，它就会不断繁殖并逐步取代人类细胞。体细胞杂交虽不常见但也会发生，如人类套细胞淋巴瘤细胞系NCEB-1就携带了小鼠的七条染色体。

      异种移植也会导致细胞系交叉污染和错误鉴定，来自异种移植的复苏细胞会被宿主动物细胞所替代。

      一般而言，交叉污染最终的结果将会是少量适应细胞且快速的替代。两个细胞系不能持续共存于同一个培养环境，除非它们是共生关系，但这种情况据我们所知还未有报道。一个细胞群经过许多次传代后还能包含一个稳定的混合基因组，唯Y已知的情况是体细胞杂交。

     通过对细胞错误识别和交叉污染长达50年的追踪和研究，STR分型方法已成为对人源细胞和小鼠细胞进行鉴定的标准方法，然而该方法的弊端是不能进行其他物种的鉴定，并无法识别不同物种间的交叉污染。

     美德华生细胞种属鉴定：我公司CELL STR ID®细胞种属鉴定及种间交叉污染质控检测体系,通过对人、小鼠、大鼠、非洲绿猴、仓鼠、猪、狗、牛、羊、兔等10种种属特异性基因COI进行特异探针序列设计，并进行同时扩增和检测，因每种种属的特异基因片段大小特异，通过判断各自特异性序列是否扩增以及出现的片段大小就可以判断待检样本是否特定种属以及是否有多种种属DNA共存。通过该体系检测只需要单次实验就可以快速判断待检细胞样本是否人源或其它种属DNA或多种属DNA交叉污染。

      提供细胞及其制剂的同源性质控及交叉污染监控服务，只为细胞可靠身份放行。

      用种属荧光复合引物 MIX 对动物线粒体 COI 基因进行扩增（参考文献：Species identification in cell culture: a two-pronged molecular approach， In Vitro Cellular & Developmental—Animal (2007)。

二、细胞种属鉴定服务内容

（一）细胞种属鉴定服务流程

（二）细胞种属鉴定服务特点

      1．用种属荧光复合引物 MIX 对动物线粒体 COI 基因进行扩增、扩增产物在 ABI 3130XL 型遗传分析仪上进行毛细管电泳检测和分析。

      2．灵敏度高。可以鉴别细胞样本中含有的少量人、小鼠、大鼠、非洲绿猴、仓鼠、猪、狗、牛、羊、兔等10种种属细胞污染，检测线为皮克级。

      3．参考国际细胞鉴定委员会（ICLAC）发布的动物细胞种属鉴定标准（ASN-0003）。

      4．鉴定报告中文版或中英版（自选），以及图谱（见细胞种属鉴定检测图谱）。

（三）细胞种属鉴定注意事项

      1．样品寄送：用户提供DNA或细胞 样本，加冰袋运输；同时请注明细胞数量或DNA含量，DNA 含量大于50ng/μl，体积大于20μl。如提供细胞，请提供PBS细胞悬浮液，离心沉淀，去上清液，可常温特快专递运输（京外客户推荐方法）；细胞数量≥10⁶个。

      2．正常检测周期5-7个工作日，加急2-3个工作日。

      3．本单位所提供的细胞种属鉴定可分为科研级，工业级。科研检测：遵循ISO17025原则，样本、数据长期保存，不支持现场审查；工业级：遵循ISO17025原则，样本、数据长期保存，支持现场审查。

（四）细胞种属鉴定结果交付

      检测结果以电子版的形式发放到订单或合同上面预留的邮箱，书面报告可根据需要随时提供，寄送到贵单位。

三、细胞种属鉴定结果解释：

      1、参考国际细胞鉴定委员会（ICLAC）发布的动物细胞种属鉴定标准（ASN-0003）Species-Level Identification of  Animal Cells through Mitochondrial Cytochrome c Oxidase Subunit 1 (CO1) DNA Barcodes。

      2、内参基因与特定种属均有扩增特异峰，表示该样本为特定种属。若出现多个种属均由特异扩增峰，则提示该样本有多种不同种属DNA存在。

四、种属复合扩增MIX表

五、种属鉴定及种间交叉污染质控检测图谱及参考文献 

参考文献：

4.1、 Capes-Davis, A., Theodosopoulos, G., Atkin, I., et al. (2010) Check your cultures! A list of cross-contaminated or misidentified cell lines. Int. J. Cancer 127 (1), 1−8

4.2、Cell Lines as Biological Models: Practical Steps for More Reliable Research

4.3、Cases of Mistaken Identity   2007

4.4、ATCC SDO Workgroup ASN-0002 (2010) Cell line misidentification: the beginning of the end.