支原体分型检测

一、服务简介

      支原体( Mycoplasma)属于柔膜体纲，是介于细菌和病毒之间的一类无细胞壁的原核细胞微生物，他们是已知最小的自我复制的原核生物。支原体细胞大小和形态存在差异，大小介于细菌和病毒之间，能够透过一般滤膜（0.22 μm），呈高度多形性，有球形、杆状、丝状、分枝状等多种不能被革兰氏染色，但可在琼脂固体平板上形成“菌落”且可被甲基蓝染色。支原体以寄生和共生方式存活，部分可能导致动物、植物宿主的病变。对人致病的支原体主要有肺炎支原体、溶脲脲原体、人型支原体、生殖器支原体等。

      支原体是细胞污染物中比较常见的一种，细胞受支原体污染程度较轻时，不会表现出明显的症状，但一旦这种潜伏的污染爆发时，细胞培养液会变浑浊。原代细胞和传代细胞都可能遭受支原体污染，根据国外不同实验室的调查结果显示，有15%-80%的细胞系被支原体污染，传代细胞的污染率高于原代细胞。

      细胞系是生物医学研究中重要的工具，在细胞质量控制相关的问题中，细胞系交叉污染和微生物支原体污染是其中最为常见的质量问题。交叉污染分为种属间的交叉污染、种内不同细胞系的交叉污染。2002年(Drexler et al., 2002)对440个白血病-淋巴细胞系进行分析后发现，只有64%的细胞身份正确且支原体阴性，在交叉污染的细胞系中有50%为支原体阳性，23%的真实细胞系也有支原体阳性。

      尽管常见报道的支原体有120多种，但实验室污染细胞的支原体主要有6种（每种还有很多亚类），分别为牛源的莱氏无胆甾原体和精氨酸支原体，人源的口腔支原体和发酵支原体，猪源的猪鼻支原体，这6种支原体占实验室常见支原体污染的95%以上。

      支原体污染可能来自操作人员和细胞培养用原材料如血清和胰蛋白酶，也可能来自于本身已被污染的细胞系或菌种或毒种等。细胞受支原体污染后，功能和活性都会受到影响，会带来不可靠的实验结果和不安全的细胞制品，因此对细胞进行支原体检测十分关键。

      目前行业基本都是对细胞或细胞制品进行质控是否有支原体污染，而对具体污染的什么种类支原体很少做探究。从质量管理体系的角度来说，如果能够进一步弄清楚污染的支原体种类，有利于支原体污染溯源，通过分析污染来源及可能途径，进一步完善质量体系，加强管控，降低支原体污染的发生概率。

      我公司CELL STR ID®支原体分型检测体系,在充分分析各类支原体的16SDNA序列基础上,设计了针对支原体的特异引物探针，同时通过不同支原体的特异片段长度差异进行区分。为了实现这一目的，利用多重荧光PCR和毛细管电泳技术，实现对支原体的高灵敏度检测及不同种类的支原体进行有效区分。

二、服务内容

（一）服务流程

（二）服务特点

      1．采用多重荧光PCR支原体扩增试剂盒进行多重扩增；扩增产物经ABI3130XL基因分析仪进行检测。

      2．灵敏度高。可以鉴别细胞样本中含有的少量支原体污染，检测线为皮克级：30pg/μL。

      3．检测结果不仅可以是否有无支原体污染，同时可知其中8种支原体是那种支原体污染；随着科研技术的发展，根据需要单独列出的支原体会有所增加。

      4．鉴定报告中文版或中英版（自选），以及图谱（见支原体分型检测图谱）。

（三）注意事项

      1．样品寄送：用户提供DNA或细胞 样本，加冰袋运输；同时请注明细胞数量或DNA含量，DNA 含量最好大于50ng/μl，体积大于20μl。如提供细胞，请提供PBS细胞悬浮液，离心沉淀，去上清液，可常温特快专递运输（京外客户推荐方法）；细胞数量≥10⁶个。

      2．正常检测周期5-7个工作日，加急2-3个工作日。

（四）结果交付

      检测结果以电子版的形式发放到订单或合同上面预留的邮箱，书面报告可根据需要随时提供，寄送到贵单位。

三、支原体分型检测图谱及参考文献 

参考文献：

4.1、Mycoplasma contamination of cell cultures: Incidence, sources, effects,detection, elimination, prevention。Cytotechnology 39: 75–90, 2002

4.2  Advances in PCR-based detection of mycoplasmas contaminating cell cultures. PCR Methods         Appl 4: 199–208     Rawadi G and Dussurget O (1995)