生产用细胞鉴定

为达到质控目的，需要若干种方法，其中STR鉴定对于人源细胞和小鼠细胞，可以通过分析细胞的若干STR基因座的数据来评估该细胞的个体来源及是否存在种属内不同个体交叉污染。种属鉴定及种间交叉污染鉴定，采用线粒体细胞色素C氧化酶基因（CO1）,利用多重荧光PCR+毛细管电泳技术，可以同时确认细胞的种属来源，同时监控种属间交叉污染。

1、鉴定背景

根据2020版中国Y典生物制品通则《生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制》，新建细胞系／株、细胞库（MCB和WCB）和生产终末细胞应进行鉴别试验，以确认为本细胞，且无其他细胞的交叉污染。

     为达到上述质控目的，需要若干种方法，其中STR鉴定对于人源细胞和小鼠细胞，可以通过分析细胞的若干STR基因座的数据来评估该细胞的个体来源及是否存在种属内不同个体交叉污染。种属鉴定及种间交叉污染鉴定，采用线粒体细胞色素C氧化酶基因（CO1）,利用多重荧光PCR+毛细管电泳技术，可以同时确认细胞的种属来源，同时监控种属间交叉污染。     

2、常见生产用细胞及鉴定策略

3、生产用细胞鉴别同时应考虑支原体污染的防控

   支原体是细胞污染物中比较常见的一种，细胞受支原体污染程度较轻时，不会表现出明显的症状，但一旦这种潜伏的污染爆发时，细胞培养液会变浑浊。原代细胞和传代细胞都可能遭受支原体污染，根据国外不同实验室的调查结果显示，有15%-80%的细胞系被支原体污染，传代细胞的污染率高于原代细胞。

细胞系是生物医学研究中重要的工具，在细胞质量控制相关的问题中，细胞系交叉污染和微生物支原体污染是其中最为常见的质量问题。交叉污染分为种属间的交叉污染、种内不同细胞系的交叉污染。2002年(Drexler et al., 2002)对440个白血病-淋巴细胞系进行分析后发现，只有64%的细胞身份正确且支原体阴性，在交叉污染的细胞系中有50%为支原体阳性，23%的真实细胞系也有支原体阳性。

支原体污染的风险来源主要有：1、操作人员；2、细胞培养用原材料如血清和胰蛋白酶、培养基等；3、本身已被污染的细胞系或菌种或毒种等。细胞受支原体污染后，功能和活性都会受到影响，会带来不可靠的实验结果和不安全的细胞制品，因此对细胞进行支原体检测十分关键。

   目前行业基本都是对细胞或细胞制品进行质控是否有支原体污染，而对具体污染的什么种类支原体很少做探究。从质量管理体系的角度来说，如果能够进一步弄清楚污染的支原体种类，有利于支原体污染溯源，通过分析污染来源及可能途径，进一步完善质量体系，加强管控，降低支原体污染的发生概率。

CELL STR ID®支原体分型检测体系,在充分分析各类支原体的16S序列及特定支原体的保守基因基础上,设计了针对支原体的特异引物探针，同时根据不同支原体的特异片段长度差异进行区分。为了实现这一目的，利用多重荧光PCR和毛细管电泳技术，实现对支原体的高灵敏度检测及不同种类的支原体进行有效区分。